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干扰稳转细胞株

干扰稳转细胞株是顺利获得将设计好的shRNA序列或者CRISPRi系统稳定整合到宿主细胞基因组中，实现长期、稳定基因沉默的细胞模型。相比瞬时转染，稳转细胞株具有基因沉默效果持久、稳定均一的优势，特别适合需要长期观察基因功能的研究，如细胞增殖、分化、凋亡等表型分析，以及药物筛选等应用场景。
球盟会生物基因致力于为客户提供高质量的干扰稳转细胞系构建服务，结合多年细胞生物学经验，建立了一套成熟稳定的基因过表达实验体系，可针对多种不同细胞（包括难转染细胞、悬浮细胞），提供优质的基因敲低细胞构建服务。

服务详情

细胞类型 各种细胞类型，包括肿瘤、常规、干细胞、原代和永生化细胞系。
服务类型 shRNA干扰细胞株/CRISPRi细胞株
交付标准 1）基因干扰多克隆细胞pool（2管细胞/株，1×10^6/管） 2）基因干扰单克隆细胞≥1株（2管细胞/株，1×10^6/管） 3）实验报告
周期/价格 快至6周   在线咨询
球盟会生物基因致力于为客户提供高质量的稳转细胞系构建服务，结合多年细胞生物学经验，建立了一套成熟稳定的基因过表达实验体系，可针对多种不同细胞（包括难转染细胞、悬浮细胞），提供优质的基因过表达细胞构建服务。

服务优势

多种骨架载体选择
丰富的骨架载体库，包括慢病毒载体和转座子载体等载体类型，并带有多种启动子、荧光标签、抗性基因等选择，缩短实验周期。
高效的单克隆分选技术
3D打印技术辅助单克隆分选，1分钟即可完成细胞铺板，细胞存活率是传统方法的3倍以上。并且每个克隆均有图像，确保是单一克隆
高效的细胞转染
独家优化转染载体系统，并具有数百种细胞转染经验，可高效递送表达载体
团队经验丰富
专业的团队，拥有1000+基因编辑CRO项目经验

服务类型

可根据客户需求，并综合基因和细胞等情况，设计基因干扰方案。

shRNA（短发夹RNA）干扰稳转细胞株是顺利获得将设计好的shRNA序列稳定整合到宿主细胞基因组中，实现长期、稳定基因沉默的细胞模型。shRNA在细胞内表达后，会被Dicer酶加工成siRNA（小干扰RNA），随后siRNA与RISC（RNA诱导沉默复合体）结合，引导复合体识别并切割互补的mRNA分子，最终导致目标基因的表达沉默。  联系我们

服务流程

CRISPRi（CRISPR interference）是一种基于CRISPR系统的基因调控技术，它利用经过改造的dCas9蛋白（失活的Cas9）与单导向RNA（sgRNA）结合，靶向并结合到目标基因的转录起始位点附近，形成空间位阻，阻遏基因转录从而实现基因表达抑制。哺乳动物细胞也可将dCas9融合转录抑制因子（如KRAB等）进一步抑制基因的表达）。顺利获得设计特定的sgRNA，CRISPRi可同时靶向多个基因位点，实现复杂基因网络的协同调控，为功能基因组学研究提供了强大工具。   联系我们

服务流程

成功案例

 

策略： 针对CHRNA5基因设计并合成1条特异性短发夹RNA（shRNA）序列。将该shRNA序列克隆至慢病毒载体EDV3021-pLV3-U6-MCS-CopGFP-Puro的U6启动子下游，构建shRNA表达载体。包装生产高滴度慢病毒颗粒后，感染目标细胞系。经Puromycin抗性筛选取得稳定整合shRNA表达框的细胞株。顺利获得定量实时荧光聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测感染后细胞中CHRNA5基因的mRNA表达水平变化。检测结果证实了该shRNA能有效下调CHRNA5基因的表达（结果展示见下图/表）。

图1：EDV3021-pLV3-U6-MCS-CopGFP-Puro载体骨架图谱

图2：CHRNA5基因qRT-PCR验证结果

将目标基因SCN10A的编码序列克隆至慢病毒表达载体pLV-EF1a-MCS-3×flag-puro中，构建C端融合3×Flag标签的表达载体。包装取得高滴度慢病毒颗粒后，感染人胚肾细胞HEK293T。顺利获得蛋白质免疫印迹（Western Blot, WB）使用抗Flag抗体检测融合蛋白的表达水平，以验证目的基因的过表达效率。

注：本案例中使用的SCN10A基因过表达HEK293T细胞为球盟会生物基因公司提供的现货细胞（货号：EDC01474），保障实验的快速召开与可重复性。过表达细胞现货库

图1：pLV-EF1a-MCS-3×flag-puro骨架载体图谱

图2：qRT-PCR验证结果

案例2：基于CRISPRi系统的RPL4基因转录抑制

①效应器递送： 将球盟会生物基因载体EDV2936-pLX_311-KRAB-dCas9包装为高滴度慢病毒颗粒，感染目标细胞系，经筛选取得稳定表达KRAB-dCas9融合蛋白的细胞株（Blasticidin抗性筛选）。

②靶向sgRNA递送： 针对RPL4基因启动子/外显子区设计两条单向导RNA（sgRNA），分别克隆至慢病毒sgRNA表达载体EDV00003-LentiGuide-puro中，构建靶向表达载体。包装慢病毒后感染上述效应器稳定细胞株，顺利获得Puromycin筛选建立两株sgRNA稳定整合细胞系。

③检测： 顺利获得qRT-PCR验证RPL4在mRNA及蛋白水平的表达下调（结果见下图）。

*注：KRAB-dCas9顺利获得募集染色质抑制复合物实现表观遗传沉默，无需切割DNA即可高效抑制靶基因转录

图1：EDV00003-LentiGuide-puro载体骨架图谱

图2：RPL4基因qRT-PCR验证结果

Advantage and Characteristic

Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
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FAQ

我们主要提供哪些类型的基因干扰技术服务？（例如：siRNA转染、shRNA慢病毒/腺病毒、CRISPRi）
技术类型 适用场景 交付形式
siRNA转染 快速验证（72-96小时效果） 快速验证（干扰后细胞/实验报告）
shRNA病毒载体 长期抑制（稳定株筛选） 病毒颗粒/稳转株细胞
CRISPRi 高特异性、抑制（i）基因 dCas9细胞系+gRNA载体
siRNA： 瞬时效应（5-7天）,适合短期表型检测。
shRNA/CRISPRi： 筛选稳转株➡永久性抑制（传代20代以上仍有效）
基因干扰（Gene Knockdown）是顺利获得小RNA分子（如siRNA、shRNA）或CRISPRi系统部分抑制目标基因表达的技术： siRNA/shRNA：siRNA与细胞内的RISC复合体结合，降解靶标mRNA，阻断蛋白翻译。 CRISPRi：改造的dCas9蛋白结合gRNA后阻断基因启动子，抑制转录（不切割DNA）6。 适用场景：基因功能研究、疾病机制解析、药物靶点验证。
参数 siRNA shRNA（病毒载体） CRISPRi
作用周期 瞬时（5-7天） 长期（可稳定传代） 长期稳定
细胞适用性 易转染细胞 广谱（包括难转染细胞） 需要构建dCas9细胞系
脱靶风险 中-高 中 极低
用途 快速验证 动物/细胞模型 高精度调控
选择建议： “快速验证”： siRNA。适用于在易转染细胞中快速测试1-2个基因的功能，成本低速度快。 “建立稳定敲低细胞系”或“体内基因沉默”： shRNA (病毒递送)。技术成熟，能实现长期稳定沉默，广泛用于构建细胞模型和动物模型。 “高特异性、低脱靶、可逆调控、多基因操作、非编码RNA靶向”： CRISPRi (病毒递送建立稳定株)。

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