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产品概述
CRISPR KO极速敲除试剂盒顺利获得递送预组装的递送载体、Cas9蛋白与sgRNA复合物（RNP），实现高效、精准的基因敲除，是一款专为科研用户定制研发的即用型基因敲除试剂盒。该产品包含球盟会生物基因创新研发的 CRISPR RNP 递送载体以及经数千例实战验证过的 Cas 酶，经过特殊处理的递送载体-RNP 复合物能够在哺乳动物细胞中产生高效的基因组编辑。
储存条件及有效期
有效期6个月，储存条件-80°C，干冰运输。建议根据使用次数进行分装，避免反复冻融。
产品组分
| 产品编号 | 组分 | 规格 | 20T |
| EDKO-K04-50 | 递送载体-RNP 复合物 | 50 μL（足够 5 个 24 孔） | 24 孔板，10 μL/孔 |
| EDKO-K04-100 | 递送载体-RNP 复合物 | 100 μL（足够 5 个 12 个孔） | 12 孔板，20 μL/孔 |
注意:本产品只提供一体化的递送载体-RNP 复合物，客户需要提供 sgRNA 序列。
可选组分
| 编号 | 可选项 | 备注 |
| EDKO-K04-50 | 递送载体-RNP 复合物 | 球盟会生物基因提供 sgRNA 序列设计服务 |
| EDKO-K04-100 | 递送载体-RNP 复合物 | 人 B2M 基因 递送载体-RNP 复合物 |
实验步骤
- 1.细胞培养和铺板（以24孔板为例）
- 细胞培养至生长旺盛状态，转染前24 h，接种细胞至24孔板（对于贴壁细胞，使转染时细胞汇合度为50%~60%；对于悬浮细胞，使转染时细胞数量为1.2×105~1.6×105）。
- 请使用生长状态较好的细胞，并确保细胞无细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。
- 2. 细胞转染
- 提前将载体-RNP 复合物从 -80℃ 转移至4 ℃ 缓慢解冻，每孔加入10 μL 加入时分多次缓慢加入，加入后轻轻晃动混匀。
- 对于贴壁细胞的要求：细胞状态好，分布均匀，汇合度为50%~60%，则可直接加入本产品；
- 对于悬浮细胞的要求：细胞状态好，加入载体-RNP复合物前需将细胞团轻柔吹散，分散均匀后直接加入本产品。
- 3. 分析转染细胞
- 转染48h后，提取所转染细胞的基因组，使用特异性引物扩增靶标区域(扩增子包含sgRNA靶向切割的位置)；
- 使用TIDE (分析网址：http://tide.nki.nl/)或者ICE (分析网址：http://ice.synthego.com/#/，使用说明：http://www.synthego.com/guide/how-to-use-crispr/ice-analysis-guide) 等工具进行基因编辑效率分析。
高效编辑结果展示
图1 高效编辑细胞展示图
图 2 Jurkat (B2M) 多克隆 ICE 分析结果
图 3 HEK293T（B2M）多克隆 ICE 分析结果
FAQ
如何证明无需筛选仍能取得高编辑效率？
本产品已在多个细胞上验证，RNP系统在转染后4小时内即进入细胞发挥作用，Cas9蛋白在24-48小时降解，顺利获得瞬时高效表达实现编辑，无需持续筛选。
若使用试剂盒敲除失败，该如何处理？
使用本试剂盒进行基因敲除时，若出现敲除失败的情况，球盟会生物基因将不收取试剂盒费用，同时，您所支付的试剂盒费用可直接转为球盟会生物基因提供的基因敲除服务费用，确保您在基因编辑实验中无后顾之忧。
为何对细胞的损伤比较小？
本产品采用先进的生物分子转染技术，相比传统化学转染法的毒性及电转法的物理冲击，具有显著优势。
能否在悬浮细胞中达到相同效率？
通常而言，悬浮细胞转染难度相对较大。然而，本产品凭借卓越性能，不仅适用于贴壁细胞，在悬浮细胞中同样表现出色。以 Jurkat 细胞为例，转染 48h 后即可实现高达 97% 的编辑效率，充分彰显了本产品在悬浮细胞转染方面的高效率优势，可充分满足您对悬浮细胞转染的高标准需求。
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